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Characterisation of AAV capsid-specific CD8+ T cell responses in human subjects
L immunité pré-existante dirigée contre la capside de l AAV constitue l un des obstacles majeurs à la sécurité et à l efficacité du transfert de gène à l aide de vecteurs AAVr. En particulier, les réponses cellulaires cytotoxiques dirigées contre l AAV se sont trouvées être un défi à caractériser en...
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| Auteurs principaux : | , , , , |
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| Collectivités auteurs : | , , , |
| Format : | Thèse ou mémoire |
| Langue : | anglais |
| Titre complet : | Characterisation of AAV capsid-specific CD8+ T cell responses in human subjects / Céline Vandamme; sous la direction de Philippe Moullier et de Oumeya Adjali |
| Publié : |
2016 |
| Accès en ligne : |
Accès Nantes Université
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| Note sur l'URL : | Accès au texte intégral |
| Note de thèse : | Thèse de doctorat : Biomolécules pharmacologie, thérapeutique : Nantes : 2016 |
| Sujets : |
| Résumé : | L immunité pré-existante dirigée contre la capside de l AAV constitue l un des obstacles majeurs à la sécurité et à l efficacité du transfert de gène à l aide de vecteurs AAVr. En particulier, les réponses cellulaires cytotoxiques dirigées contre l AAV se sont trouvées être un défi à caractériser en raison de la faible fréquence des LT CD8+ circulants spécifiques de la capside, qui peuvent rarement être détectés par cytométrie de flux ou test ELISpot classiques. Ici, nous avons utilisé des tétramères de CMH classe I fluorescents en association avec un enrichissement magnétique pour détecter ex vivo des lymphocytes T CD8+ spécifiques de la capside dans des PBMCs humains. Pour la première fois, nous avons mis en évidence que tous les individus possèdent des LT CD8+ spécifiques de la capside, parmi lesquels on retrouve une sous-population de lymphocytes TEMRA mémoires effecteurs. Nous n avons par ailleurs observé aucune corrélation entre les réponses ELISpot IFNg et les fréquences ex vivo de LT CD8+ spécifiques de la capside, ce qui nous indique que ces fréquences ne sont pas prédictives de la fonctionnalité des cellules détectées. De manière intéressante, l évaluation fonctionnelle de lignées primaires humaines de LT CD8+ spécifiques de la capside, amplifiées à partir de PBMCs après enrichissement par tétramères, a révélé qu une dégranulation en réponse à des cellules cibles n était pas systématiquement corrélée à la sécrétion de Perforin et Granzyme B. Les résultats de nos travaux encouragent le développement de nouvelles technologies associant haute sensibilité de détection et évaluation poly-fonctionnelle afin de prédire l impact des réponses immunitaires cellulaires spécifiques de la capside de l AAV lors des essais cliniques de thérapie génique. Pre-existing immunity to AAV capsid constitutes one of the major hurdle to rAAV-based gene transfer's safety and efficiency in Humans. Particularly, anti-capsid cytotoxic cellular responses have proven to be a challenge to characterise because of the scarcity of circulating AAV-specific CD8+ T lymphocytes which can seldom be detected with conventional flow cytometry or ELISpot assays. Here, we used fluorescent MHC class I tetramers combined with magnetic enrichment to detect AAV-specific CD8+ T cells in human PBMCs ex vivo. For the first time, we evidenced that all individuals tested possessed a pool of AAV-specific CD8+ Tcells that displayed a TEMRA memory subset. Importantly, we observed no correlation between IFNg ELISpot responses and ex vivo frequencies of AAV-specific CD8+ T cells, which indicates that frequencies of capsid-reactive T cells are not predictive of their functionality. Interestingly, functional assessment of primary AAV8- specific CD8+ T cell lines, expanded from PBMCs after tetramer enrichment, revealed that degranulation activity in response to target cells wasn t systematically related to secretion of granzyme B and perforin. Our data encourage the development of new technologies combining accrued detection sensitivity and poly-functional assessment to predict the impact of capsid-specific cellular immune responses in rAAV-mediated clinical trials. |
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| Variantes de titre : | Caractérisation des réponses cellulaires T CD8+ spécifiques de la capside de l'AAV chez l'Homme |
| Notes : | Titre provenant de l'écran-titre Ecole(s) Doctorale(s) : École doctorale Biologie-Santé Nantes-Angers Partenaire(s) de recherche : Université Bretagne Loire (COMUE), Thérapie Génique Translationnelle des Maladies Génétiques (Nantes) (Laboratoire) Autre(s) contribution(s) : Federico Mingozzi (Président du jury) ; Bobby Gaspar (Rapporteur(s)) |
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